سی بعضی از ویژگیهای پکتیناز و گالاکتوزیدازهای گوارشی سوسک برگخوار سیب زمینی leptinotarsa decemlineata

سوسک برگخوارسیب زمینی leptinotarsa decemlineata (coleoptera:chrysomelidae) یک آفت قابل توجه و مهم سیب زمینی در آمریکای شمالی و اروپا و آسیا است که می تواند باعث حذف شدید برگ و کاهش عملکرد آن می گردد; مطالعه ی آنزیم های گوارشی در این حشره، یک شیوه موثر در توسعه ی روش های کنترل مفید آن به حساب می آید. گوارش کربوهیدرات ها در معده میانی سوسک برگخوارسیب زمینی بسیار مهم است، هرگونه اختلال در گوارش آنزیمی کربوهیدرات ها حشره را از بدست آوردن منابع انرژی بصورت کارآمدی محروم می کند، بنابراین آگاهی از خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم های گوارشی اهمیت بالایی دارد. در این پروژه آنزیم های آلفا و بتاگالاکتوزیداز و پکتیناز در معده میانی سوسک برگخوارسیب زمینی بررسی شدند. این آنزیم ها از معده میانی لارو و بالغین سوسک کلرادوی سیب زمینی جداسازی شدند، پس از هموژنایز و سانتریفوژ کردن معده میانی حشره، ویژگی های مهم آنها با استفاده از سوبسترای اختصاصی آنزیم ها،p -نیتروفنیل-?-d-گالاکتوپیرانوزید(np?gal) برای آلفاگالاکتوزیداز، p-نیتروفنیل-?-d-گالاکتوپیرانوزید (np?gal) برای بتاگالاکتوزیداز و پکتین 1% برای پکتیناز مورد آزمایش قرار گرفت. براساس نتایج بدست آمده مشخص شد که هر سه آنزیم در سوسک برگخوارسیب زمینی فعالیت می کنند. فعالیت ویژه برای آلفاگالاکتوزیداز در معده میانی لاروهای سنین 3 ، 4 و حشره بالغ به ترتیب،u/mg 69 /0، u/mg 69/1 وu/mg 41/1; برای بتاگالاکتوزیداز به ترتیب، u/mg 58/2، u/mg 84/2 و u/mg 04/3 و برای پکتیناز در معده میانی لارو سن4 و حشره بالغ به ترتیب، u/mg 05/0 و u/mg 06/0 اندازه گیری شد. بیش ترین فعالیت آنزیم برای آلفاگالاکتوزیداز در ph 5، 5 و 5/5 به ترتیب برای لاروهای سنین3 ، 4 و حشره بالغ; برای بتاگالاکتوزیداز به ترتیب در ph 5، 5/4 و 5 و برای آنزیم پکتیناز لارو سن4 و حشره بالغ در طیف ph 6-5 اتفاق افتاد. اثر دماهای مختلف بر فعالیت آنزیم ها مورد آزمایش قرار گرفت، نتایج حاکی از آن است که آنزیم آلفاگالاکتوزیداز بیش-ترین فعالیت را در معده میانی لارو سن3 و 4 و حشره بالغ به ترتیب در دماهای°c50،°c50 و °c55; آنزیم بتاگالاکتوزیداز به ترتیب در دماهای °c50، °c50 و طیف دمای °c55-40 و آنزیم پکتیناز برای لارو سن4 و حشره بالغ بیش ترین فعالیت را به ترتیب در دماهای°c40 و °c35 نشان می دهد. بررسی اثر ترکیبات شیمیایی مختلف بر فعالیت سه آنزیم نشان می دهد که sds، اوره و تریس فعالیت هرسه آنزیم را کاهش می دهد. یون های سدیم و کلسیم باعث افزایش فعالیت آنزیم پکتیناز گردید و یون سدیم در غلظت پایین فعالیت آنزیم بتاگالاکتوزیداز را افزایش داد. به منظور مشاهده فعالیت آنزیم های پکتیناز و بتاگالاکتوزیداز در معده میانی سوسک برگخوارسیب زمینی، به ترتیب از روش هایsodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (sds-page) برای پکتیناز در ژل 9% و روش none denaturing page برای بتاگالاکتوزیداز در ژل 5/7% استفاده شد، نتایج نشان می دهد که آنزیم بتاگالاکتوزیداز دارای چهار ایزوزایم و پکتیناز دارای دو ایزوزایم است.